目標
在不進行衍生的條件下, 證明ACQUITY UPLC® H-CLASS系統(tǒng)的多元混合能力，配合使用沃特世 黃曲霉毒素分析包，可提高黃曲霉毒素M1，G2，G1，B2和B1分離的分辨率且縮短分析時間。
背景
黃曲霉毒素是由真菌、黃曲霉菌和寄生曲霉代謝生成的一組真菌毒素。它們可出現(xiàn)在各種食品中，如谷物、花生、調(diào)味料和乳制品。天然形成的黃曲霉毒素有四種：B1，B2，G1和G2。二次代謝產(chǎn)物M1，是乳牛食用B1污染的谷物后代謝生成的副產(chǎn)物，可污染乳制品，如牛奶。
這些化合物具有毒性，可對人類和動物產(chǎn)生致癌作用。B1和G1是四種天然產(chǎn)生的毒素中毒性最大的兩種。由于其毒性強，政府法規(guī)部門對食品中黃曲霉毒素的含量進行了嚴格的限制。因此，食品行業(yè)需要靈敏、精確且重現(xiàn)性良好的分析方法對這些物質(zhì)進行檢測。這些方法通常基于反相HPLC色譜分離和熒光檢測。但是，由于反相洗脫會使黃曲霉毒素B1和G1的熒光效應(yīng)發(fā)生猝滅，通過使用衍生化以增強這些待測物的反應(yīng)。常規(guī)檢測是使用三氟乙酸（TFA）進行柱前衍生以及采用碘法、電化學衍生溴法或光化學UV衍生法的柱后衍生。
這些方法耗時較長，并且需要購置昂貴的柱后反應(yīng)器，或為了獲得電化學生成溴而購置的電化學單元。尤其是TFA的使用會增加技術(shù)人員的安全隱患。
解決方案
樣品前處理采用基于VICAM AflaTest®P方法學的沃特世黃曲霉毒素分析包進行處理。采用ACQUITY UPLC H-CLASS系統(tǒng)，配合其UPLC®優(yōu)化的熒光（FLR）檢測器，黃曲霉毒素M1，G2，G1，B2和B1的基線分離分析時間為4.5分鐘。無需進行衍生化。ACQUITY UPLC H-CLASS系統(tǒng)擁有四元溶劑管理器（QSM）和Auto.Blend TM技術(shù)，可對溶劑進行動態(tài)程序化混合。將水、甲醇和乙腈的三路混合連接ACQUITY UPLC BEH C18柱即可完成分離。
圖1. 采用FLR 檢測器和高通量流通池的ACQUITY UPLC H-CLASS系統(tǒng)進行黃曲霉毒素分離
總結(jié)
采用ACQUITY UPLC H-CLASS系統(tǒng)兩個最直接的優(yōu)勢是，保留了傳統(tǒng)HPLC儀器的操作方法的同時，應(yīng)用UPLC的功能，可將分析時間從12分鐘大大縮短至4.5分鐘。
消除柱后衍生系統(tǒng)和柱后流量降低造成的譜帶展寬，形成尖峰，實現(xiàn)高信噪比。因此能夠?qū)崿F(xiàn)更精確的積分和定量。無需衍生化也可以簡化系統(tǒng)，降低對培訓、故障排除和維護的需求。另外，采用UPLC替代HPLC也可以降低約85%的溶劑消耗量。
配有FLR檢測器和黃曲霉毒素分析包的ACQUITY UPLC H-CLASS系統(tǒng)可使實驗室更靈敏地對黃曲霉毒素進行定量分析而無需進行衍生化。分析時間的減少可使得樣品周轉(zhuǎn)更快，效率更高。