2012年8月媒體報(bào)道，某檢測(cè)中心對(duì)國(guó)內(nèi)三家葡萄酒上市公司的十款葡萄酒進(jìn)行檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)農(nóng)藥多菌靈、甲霜靈超標(biāo)，這兩種農(nóng)藥均對(duì)人體存在致癌風(fēng)險(xiǎn)。消息一經(jīng)報(bào)道，又一次引起了人們對(duì)農(nóng)藥殘留的關(guān)注，多菌靈、甲霜靈的檢測(cè)成為檢測(cè)機(jī)構(gòu)關(guān)注熱點(diǎn)。查閱已發(fā)表文章中關(guān)于農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法，發(fā)現(xiàn)大量文獻(xiàn)報(bào)道使用AB SCIEX公司儀器檢測(cè)食品中農(nóng)藥殘留[1]，參考文獻(xiàn)報(bào)道方法建立關(guān)于多菌靈和甲霜靈的LC-MS/MS檢測(cè)方法。
為了更有效檢測(cè)和監(jiān)控多菌靈和甲霜靈殘留，需對(duì)上述兩種殺菌劑同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)。AB SCIEX公司一直致力于為用戶(hù)提供全方位的解決方案，包含 iDQuant™ 農(nóng)殘篩查標(biāo)樣試劑包（見(jiàn)圖1左圖），試劑包含兩百余種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液，除此之外整體方案還提供成熟的適用于多種基體樣品中農(nóng)藥殘留 iMethod™ 測(cè)試方法包[2]（見(jiàn)圖1右圖），供廣大檢測(cè)機(jī)構(gòu)選擇。以下列出在葡萄酒中上述兩種農(nóng)藥的檢測(cè)的詳細(xì)實(shí)驗(yàn)方法。
圖1 AB SCIEX公司整體解決方案
1.樣品前處理方法
稱(chēng)取10.0 g樣品于50 mL燒杯中，加入20 mL水溶液，稀釋混勻，待凈化。
依次用3.0mL的正已烷+乙酸乙酯（1+1），3.0mL去離子水活化HLB 小柱，待凈化的樣品6.0mL加至SPE凈化柱，萃取過(guò)程需要在負(fù)壓條件下進(jìn)行，最后用6.0mL的去離子水洗滌提取容器，一并過(guò)柱，抽真空2 min，將小柱抽干；同時(shí)準(zhǔn)備活化氨基－硫酸鎂小柱，在LC- NH2氨基小柱中裝入1/3高度的無(wú)水硫酸鎂，用5 mL正已烷+乙酸乙酯（1+1）活化氨基－硫酸鎂小柱，最后保持填料上剩余0.5 mL正已烷+乙酸乙酯（1+1）活化溶液；由上而下將HLB 小柱（上）NH2小柱（下）進(jìn)行串聯(lián)，用15 mL正已烷+乙酸乙酯（1+1）分三次對(duì)串聯(lián)小柱進(jìn)行洗脫，并且洗脫開(kāi)始時(shí)需要負(fù)壓抽真空，以便洗脫進(jìn)行，收集全部洗脫液于15 mL玻璃刻度試管，置于40 ℃下氮吹干，用甲醇:水為5:95溶解殘?jiān)?，定容?.0 mL，取上層清液供LC/MS/MS分析。
2.LC-MS/MS儀器條件
(1) 液相色譜參數(shù)：
色譜柱： Phenomenex Synergi Fusion-RP 2.0X50mm，4um
流動(dòng)相：A：水（含5mM 甲酸銨） B：甲醇（含5mM 甲酸銨）
柱溫：30℃，流速：250μl/min；
流動(dòng)相：A：水（5mM乙酸銨），B：甲醇（5mM乙酸銨）；
梯度洗脫，洗脫條件見(jiàn)表1：
表1液相色譜條件
|
Time(min) |
Flow Rate (μL/min) |
A(%) |
B(%) |
|
0 |
250 |
95 |
5 |
|
5 |
250 |
50 |
50 |
|
12 |
250 |
10 |
90 |
|
14 |
250 |
10 |
90 |
|
16 |
250 |
95 |
5 |
|
17 |
250 |
95 |
5 |
(2) 質(zhì)譜條件參數(shù)：
離子源： Turbo V™ 離子源；
掃描模式：正離子
采集模式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)MRM
表2 多菌靈和甲霜靈的離子對(duì)及參數(shù)信息表
|
編號(hào) |
英文名 |
中文名 |
Q1 |
Q3 |
RT (min) |
|
1 |
Carbendazim |
多菌靈 |
192.2 |
160.1* |
7.8 |
|
2 |
Metalaxyl |
甲霜靈 |
280.2 |
220.2* |
10.2 |
注：帶*為定量離子對(duì)；
以上質(zhì)譜參數(shù)適用于A(yíng)B SCIEX公司API TripleQuad 3200/4000/4500/5000/5500/6500以及QTRAP 3200/4000/4500/5500/6500型號(hào)儀器；
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
多菌靈和甲霜靈總離子譜圖如下：
結(jié)論
AB SCIEX提供的全方位解決方案，可同時(shí)測(cè)定葡萄酒中多菌靈和甲霜靈。
參考文獻(xiàn)
[1] Kaushik Banerjee, Dasharath P. Oulkar, Soma Dasgupta. Validation and uncertainty analysis of a multi-residue method for pesticides in grapes using ethyl acetate extraction and liquid chromatography–tandem mass spectrometry[J]. Journal of Chromatography A, 2007,1173: 98–109
[2] AB SCIEX官方網(wǎng)站有關(guān)食品及飲料殘留檢測(cè)方法的網(wǎng)頁(yè)：http://www.absciex.com.cn/products/methods/imethod-tests-for-food-and-beverage