BZ010 -水稻Cry1Ac 基因序列定性PCR 檢測(cè)試劑盒
包括100 個(gè)擴(kuò)增反應(yīng)所需的試劑
【試劑盒組成】
2 x 275 μl Cry1Ac 反應(yīng)試劑 (Cry1Ac mastermix; -20oC 保存)
1 x 50 μl 陽(yáng)性對(duì)照 (Positive control; -20oC 保存)
【保存條件】
1.反應(yīng)試劑和陽(yáng)性對(duì)照應(yīng)儲(chǔ)存在 -20°C。保質(zhì)期標(biāo)注在盒子上。
2.請(qǐng)分裝PCR 反應(yīng)試劑，以避免重復(fù)冷凍和解凍。頻繁的解凍和冷凍可能導(dǎo)致成分失去活性。
3.使用前在冰上溶解各試劑并充分混合，不要旋渦振蕩含酶的擴(kuò)增反應(yīng)試劑。
【操作過(guò)程】
1．在冰上解凍PCR 反應(yīng)試劑。
2．準(zhǔn)備反應(yīng)試劑：
3．加入適當(dāng)份量的DNA 模版和雙蒸水。
每次PCR 檢測(cè)都應(yīng)該設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照（2 μl）和陰性對(duì)照（2 μl 水）
每個(gè)檢測(cè)樣品應(yīng)該設(shè)置兩個(gè)PCR 重復(fù)反應(yīng)
為了驗(yàn)證陰性實(shí)驗(yàn)結(jié)果不是由于樣本中存有PCR 抑制物而導(dǎo)致PCR 呈陰性反應(yīng)，建議在測(cè)試樣本中加1 μl 的陽(yáng)性對(duì)照作為spiking 對(duì)照 (spiking control)，同時(shí)進(jìn)行PCR 反應(yīng)。
4．將準(zhǔn)備好的PCR 管放置在PCR 儀中，按照特定循環(huán)條件運(yùn)行。
5．實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析
PCR 的產(chǎn)物需要通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。
產(chǎn)物長(zhǎng)度: 1000 b.p.
陰性的實(shí)驗(yàn)結(jié)果有幾個(gè)可能性：
本中不存在目的片段；
樣本中目的片段的量低于檢測(cè)值；
樣本中存有 PCR 抑制物。
Spiking 對(duì)照
試劑盒中設(shè)計(jì)spiking 對(duì)照 (spiking control) 是為了確定沒(méi)有發(fā)生PCR 抑制。如果樣本中加了陽(yáng)性對(duì)照以后得出陰性結(jié)果，說(shuō)明樣本中存在PCR 抑制物，那幺此次陰性的實(shí)驗(yàn)結(jié)果就不能作為正確的結(jié)果，需要重新開(kāi)始樣本核酸的提取和PCR 擴(kuò)增。